文章目录

文题释义：

0引言Introduction

1 材料和方法Materials and methods

1.1 设计

1.2 时间及地点

1.3 材料

1.4 方法

    1.4.1 细胞培养

    1.4.2 转染及转染效率检测

    1.4.3 RT-qPCR检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平

    1.4.4 成球实验

    1.4.5 软琼脂集落形成实验

    1.4.6 流式细胞术检测CD24+CD44+细胞亚群比例

1.5 主要观察指标

1.6 统计学分析

2 结果Results

2.1 转染miR-7-5p mimics/inhibitor对人胃癌SGC-7901细胞中miR-7-5p表达水平的影响

2.2 miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞成球能力的影响

2.3 miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞软琼脂集落形成能力的影响

2.4 miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞中CD24+CD44+细胞比例的影响

2.5 miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞中Nanog和Sox2 mRNA表达的影响

3 讨论Discussion

文章摘要:背景:miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调,主要发挥抑癌作用。现已证实,miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而,目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少,机制尚不明确。目的:探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。方法:以胃癌细胞株SGC-7901为模型,用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞,转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平,采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力,流式细胞术检测CD24⁺CD44⁺细胞亚群比例。结果与结论:（1）与inhibitor NC或NC组比较,转染miR-7-5p inhibitor或mimics后,胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显著降低或升高（P <0.01）;（2）与NC组比较,miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂集落形成数量明显减少（P <0.05,P <0.01）,而miR-7-5p inhibitor组成球数量和集落形成数量则明显高于miR-7-5p inhibitor NC组（P <0.05,P <0.01）;（3）miR-7-5p mimics组CD24⁺CD44⁺细胞比例明显低于NC组（P <0.01）,而miR-7-5p inhibitor组CD24⁺CD44⁺细胞的比例显著高于inhibitor NC组（P <0.01）;（4）miR-7-5p mimics组Nanog和Sox2 mRNA表达明显低于NC组,miR-7-5p inhibitor组Nanog和Sox2 mRNA表达显著高于inhibitor NC组（P <0.05,P <0.01）;（5）结果表明,miR-7-5p可以通过减弱胃癌细胞的成球能力、软琼脂集落形成能力以及降低胃癌细胞中CD24⁺CD44⁺细胞亚群比例等方式抑制胃癌细胞的干样特性,其机制可能与调控干性相关基因Nanog和Sox2的表达有关。

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