文章摘要:目的 探讨MKN-45细胞外泌体（exosome）携带的微小RNA-552（miR-552）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移和血管生成能力的影响。方法 （1）将MKN-45细胞分为MKN-45组（不转染任何质粒）、MKN-45 miR-552 inhibitor组[转染抑制miR-552表达质粒（miR-552 inhibitor）]、MKN-45 NC inhibitor组[转染对照质粒（NC inhibitor）]。提取、纯化、鉴定MKN-45细胞外泌体，采用免疫印迹法（WB）检测外泌体标志物分化抗原63（CD63）、分化抗原9（CD9）和肿瘤易感基因101（TSG101）蛋白的表达。（2）将HUVEC细胞分为HUVEC组（加入PBS溶液）、HUVEC-exo组（加入MKN-45细胞外泌体）、HUVEC-NC inhibitor-exo组（加入转染NC inhibitor的MKN-45细胞的外泌体）和HUVEC-miR-552 inhibitor-exo组（加入转染miR-552 inhibitor的MKN-45细胞的外泌体），采用外泌体示踪实验检测外泌体是否进入HUVEC细胞；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测miR-552的表达；采用噻唑蓝（MTT）法检测HUVEC细胞的增殖情况；采用Transwell小室法检测HUVEC细胞的迁移情况；采用血管生成实验检测血管生成能力。结果 本研究成功从MKN-45胃癌细胞中提取了外泌体，透射电镜观察下外泌体均呈圆形或椭圆形，直径为100～150 nm，可见外泌体囊泡结构；WB法检测到外泌体表面表达标志物CD63、CD9和TSG101蛋白。示踪实验结果显示，MKN-45细胞来源的外泌体成功被HUVEC细胞内化。与MKN-45组和MKN-45 NC inhibitor组相比，MKN-45 miR-552 inhibitor组外泌体中的miR-552表达水平降低（P<0.05）；与HUVEC组相比，HUVEC-exo组24、48和72 h的A490值较高，且迁移细胞数、小管生成节点数目和miR-552表达水平升高（P<0.05）；与HUVEC-NC inhibitor-exo组相比，HUVECmiR-552 inhibitor-exo组24、48和72 h的A490值降低，且迁移细胞数、小管生成节点数和miR-552表达水平降低（P<0.05）。结论 MKN-45细胞外泌体携带的miR-552可显著促进HUVEC细胞的增殖、迁移与血管生成。

文章关键词:

论文分类号:R735.2

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